Sucrose/D-Glucose/D-Fructose

Til bestemmelse af sukrose, D-glukose og D-fructose i levnedsmidler så som øl, brød og bageringredienser, drikkevarer, slik, chokolade, kaffe, sukkervarer, mejeriprodukter, æg og ægge produkter, frugt og grøntsager, frugt og grøntsagsprodukter, honning, is og kødprodukter, sennep, peber, te produkter, raffineret sukkerprodukter, vin og alle levnedsmidler indeholdende sukker, dyrefoder, papir, medicin, tobak, og biologiske prøver.

Sucrose spiller en stor rolle i planters metabolisme. Udvindingen af sucrose fra sukkerrør og roer er økonomisk fordelagtigt. Sucrose hydrolyseres til/inverteres til D-glucose + D-fructose. Sucrose er en vigtig ingrediens i mange fødevarer.

D-Fructose findes hovedsageligt i planter, hvor det udgør en vigtig komponent i fx frugt. D-fructose er en komponent af mange di, tri og oligosaccharider og ikke mindst en vigtig komponent af polysaccheridet inulin.

D-glucose er en essentiel komponent i kulstofomsætningen. Bestemmelser af D-glucose er vigtig i biokemien, klinisk kemi og i fødevareindustrien. Som regel bestemmes koncentrationen af D-glucose i kombination med andre karbonhydrater, som regel maltose og sucrose.

Enzymreaktionerne:

Sucrose hydrolyseres/inverteres med β-fructosidase (invertase) til D-glucose

D-fructose omdannes ligeledes til D-glucose, under tilstedeværelsen af co-faktoren ATP og enzymerne fructose-6-fosfat(F-6-P) og phosphoglucose isomerase (PGI)

Slutteligt omdannes D-glucose under tilstedeværelsen af co-faktorene ATP og NADP+ samt enzymerne hexokinase og glucose-6-phosphate til D-gluconate-6-P

Under den sidste reaktion reduceres NADP+ til NADPH. Mængden af NADPH er støkiometrisk ækvivalent til mængden af D-glucose i prøven.

Niveauet af NADPH i enzymreaktionen bestemmes spektrofotometrisk ved at måle lysabsorbansen ved 334, 340 eller 365 nm.

Sucrose koncentrationen bestemmes ved at bestemme koncentrationsforskellen på D-glucose før og efter enzymatisk inversion af sucrose.

Detektionsniveauet for D-glucose + sucrose + D-fructose er 2 mg/l - 1,5 gram/l