D-3-Hydroxybutyric acid

Til bestemmelse af D-3-Hydroxybutyrat i alle former for æggeprodukter og i biologiske prøver.

D-3-Hydroxybutyrat findes i blodet og i de fleste organer. En stigning i D-3-Hydroxybutyrat koncentrationen i påvises i høns, allerede 6 dage efter befrugtningen. D-3-Hydroxybutyrat er derfor en indikator for befrugtede høns.

Lovmæssigt må koncentrationen af D-3-Hydroxybutyrat i tørrede æggeprodukter ikke overstige 10mg/kg.

Enzymreaktionerne:

Glutamat koncentration i prøven bestemmes vha. af 2 successive enzymrektioner.

1) D-3-Hydroxybutyrat + NAD+ ↔ acetoacetat + NADH + H+ , reaktion 1. katalyseres af enzymet 3-hydroxybuteratdehydrogenase (HBDH)

Reaktion 1. er ufuldstændig og ligevægten forskydes mod syntesen af 2-oxogluterate ved at lade NADH indgå i en irreversibel enzym reaktion med iodonitrotetrazolium (INT)

2) NADH + INT → NAD+ + formazan , reaktion 2 katalyseres af enzymet diaphorase

Mængden af den chromogene komponent formazan er støkiometrisk ækvivalent til mængden af D-3-Hydroxybutyrat i prøven.

Koncentrationen af formazan dannet i enzymreaktion 2 bestemmes spektrofotometrisk ved at måle lysabsorbansen ved 492 nm.

Detektionsniveauet er på 0,2 mg/l - 0,12 g/l